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分離膠對血清中HBV DNA測定結果的影響

當前分析
分離膠促凝劑真空負壓采血管不僅填充有進口分離膠，而且在采血管內壁上均勻涂布有促凝劑，因此可大大縮短血液凝固時間。進口分離膠對血清中的蛋白的吸附能力低，穩定性強，離心后的分離膠固化形成屏障，平整地將血清與血細胞完全分離，能夠有效阻止血清和血細胞間的物質交換，從而有利于獲得高質量的血清，使血液檢測的結果更加真實，也有利于提高血清的收集率。目前分離膠促凝劑真空負壓采血管主要用于以血清標本為檢測對象的臨床生化檢驗、免疫學檢驗等。但對分離膠促凝劑真空負壓采血管與普通第二代促凝劑采血管所采集全血標本，并在分離血清后以血清作為檢測對象進行 乙 型 肝 炎 病 毒DNA 熒光定量聚合酶鏈反應測定結果差異的相關研究較少。為了探討分離膠對血清中HBV DNA測定結果的影響，筆者進行了相關對比試驗和分析，結果報道如下。

資料與方法
隨機選取90例本院住院和門診乙型肝炎乙肝患者其中男52例女38例平均年齡(45歲)每例患者采用2種采血管進行全血標本采集，患者在接受1次靜脈穿刺后分別用2種采血管采集全血標本，其中分離膠促凝劑真空負壓采血管為試驗組，未添加分離膠的普通第二代促凝劑真空負壓采血管為對照組各采集3mL靜脈血標本。

耗材：
采用統一的不同類型一次性人體靜脈血采集管

方法：
90例患者分別用分離膠促凝劑真空負壓采血管和促凝劑真空負壓采血管，同時各無菌采集空腹靜脈血,3mL分離膠促凝劑真空負壓采血管采血后立即180度輕輕顛倒混勻5-6次室溫放置20分鐘后，8cm為離心半徑3500r/min離心10min。將以上各組來源的血清標本分別按HVB檢測試劑盒說明書進行HBV DNA定量擴增檢測。所測結果用拷貝數的對數值表示。（2）HBV DNA提取和擴增： 直接吸取血清:100L，加等量的DNA濃縮液充分混勻，5cm為離心半徑12000r/min離心10min,棄上清液,加20LDNA提取液充分混勻,100度金屬浴10min前后誤差不超過1min,靜置6-8h以5cm為離心半徑10000r/min離心5min,取上清液5l做PCR反應。將點好樣的反應管放入PCR儀上，93度2min預變性,然后按10個循環。每批PCR試驗均同時檢測陰陽性對照標本和臨界陽性標本。
統計學處理!采用SPSS13.0統計軟件對試驗數據進行配對統計學處理；采用配對t檢驗進行檢測結果比較,p〈0.05時比較差異有統計學意義.

結果

分離膠促凝劑真空負壓采血管與普通第二代促凝劑真空負壓采血管分離血清進行檢測結果見表。討論

隨著分子生物學的發展，乙肝患者的血清學檢測已經從以常規的“兩對半”檢測間接反映患者體內病毒是否復制，開始轉向血清學的HBV DNA檢測。乙肝對人類危害性極大，病毒的活躍復制則是啟動或激發肝臟組織炎性反應的因素，因此從HBV DNA定量的角度檢測對臨床診斷和評價病毒復制水平有十分重要的意義。目前臨床上絕大多數都是以分離自用普通第二代促凝劑真空負壓采血管所采集的全血標本的血清進行HBV DNA檢測，所以本研究選擇該種采血管作為對照組。FQ-PCR技術是在常規PCR基礎上添加了熒光標記探針，在無特異性PCR發生時，熒光信號不改變；當有特異性PCR擴增時，熒光信號增強。在FQ-PCR檢測過程中，實時檢測反應體系中熒光信號的變化，參照陽性梯度標準品，由電腦自動計算出樣品起始DNA定量結果。由于分離膠技術不斷得到推廣，分離膠促凝劑真空負壓采血管在臨床檢驗醫學工作中得到廣泛應用。但分離膠促凝劑真空負壓采血管分離血清后對HBV DNA檢測結果的影響相關報道很少。本研究結果顯示，使用分離膠促凝劑真空負壓采血管的90例乙肝患者血清HBV DNA的檢測結果對數值為,4.92+-0.19使用普通促凝劑真空負壓采血管時乙肝患者血清HBV DNA的檢測結果對數值為；經配對檢驗分析比較，兩者間的差異無統計學意義p0.05。因此使用分離膠促凝劑真空負壓采血管不會對HBV DNA檢測產生影響，而分離膠促凝劑真空負壓采血管有利于更快速地分離血清進行HBV DNA檢測，能大大提高工作效率，值得在臨床PCR擴增實驗室中廣泛